一、服务简介

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

二、技术流程

1、提取细胞或组织蛋白、并进行蛋白含量；

2、制备SDS-PAGE胶；

3、蛋白样品变性、电泳；

4、电泳转膜；

4、封闭；

5、加一抗，TBST洗涤；

6、HRP标记的二抗BST洗涤；

7、ECL试剂作用；

8、X-光片曝光、显影或化学发光；

9、结果分析

1、组织样本

需要量：每个样本至少100mg；

运输：干冰运输

2、细胞样本

需要量：每个检测样本需提供至少5*10^5细胞量（可做3条带）；

运输：25T细胞培养瓶，灌满培养基新鲜运输或提供细胞冻存管，干冰运输

3、提好的蛋白

运输：干冰运输

4、一抗

运输：依据说明书，一般4℃或-20℃运输，严禁反复冻融

5、蛋白定量结果（见交付实验报告或者交付的Excel）；

6、灰度值分析结果（Excel ）；

7、膜电泳曝光图（jpg/png/ppt）