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EMSA检测

一、服务简介

凝胶迁移(EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,最初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用,可用于定性和定量分析。目前用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,在琼脂糖胶或非变性胶中电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,进行未知蛋白的鉴定。


二、技术流程

1、 核蛋白样本提取与蛋白定量。

2、 生物素标记DNA3’端并去除TdT。

3、 Super-Shift反应,配制6.5%聚丙烯酰胺凝胶,配制好各反应体系,EMSA室温结合反应20min,电泳上样。

4、 电转膜,操作方法同常规Western blot转膜操作。

5、 紫外交联,将核酸交联于PVDF膜上。

6、 化学发光法检测生物素标记的探针


三、服务说明

1、细胞样本:需提供至少1*10^7细胞量;

2、新鲜组织样本:大于500mg/样本,干冰运输;

3、目的基因信息、蛋白信息及待测样本物种信息;

4、提供转录因子特异性抗体

5、若客户已制备好探针、蛋白样品可以提供

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